不可以，轉(zhuǎn)染是通過物理或化學(xué)方法將外源 DNA轉(zhuǎn)入細胞的過程，磷酸鈣轉(zhuǎn)染法和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法為例，兩種方法都需要在轉(zhuǎn)染24h 前進行細胞傳代，且細胞密度達到70%-80%方可進行轉(zhuǎn)染實驗。而細胞復(fù)蘇后， 細胞未達到最佳的狀態(tài)，活力為完全恢復(fù)，細胞密度未達到要求，故而不可用復(fù)蘇細胞直接加質(zhì)粒進行實驗。

       是的，細胞密度會影響轉(zhuǎn)染性能。細胞匯合度在 70-90％時具有優(yōu)異的轉(zhuǎn)染性能

        傳代次數(shù)可能會影響轉(zhuǎn)染實驗。傳代次數(shù)過多可能會降低轉(zhuǎn)染效率。我們不推薦超過20-30 次傳代的細胞。如果轉(zhuǎn)染性能下降并且細胞已經(jīng)培養(yǎng)過很長時間或過度不當傳代，我們建議您從液氮中復(fù)蘇一管新細胞重新培養(yǎng)。

        同一種轉(zhuǎn)染試劑對于不同的細胞系和細胞，其轉(zhuǎn)染效果都不一樣，建議您查看相關(guān)推薦后選擇最適合的轉(zhuǎn)染試劑。

        一般情況下，無論如何嘗試控制轉(zhuǎn)染影響因素，兩次轉(zhuǎn)染的效率仍會表現(xiàn)出一定程度的差異性。轉(zhuǎn)染時，請保持所有轉(zhuǎn)染條件基本一致，如細胞匯合度、傳代次數(shù)和質(zhì)粒添加量等。盡可能使用代次低的細胞。

        瞬時轉(zhuǎn)染克隆的表達水平通常比較高，因為瞬時轉(zhuǎn)染細胞通常具有較高的外源基因拷貝數(shù)（每個細胞幾百個）。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆通常有 1-2 個拷貝整合進基因組，因此其表達水平較低。有時候，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的表達水平低是因為當組成型表達重組蛋白時對細胞造成了負面影響。

        脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中不是必須需使用無血清培養(yǎng)基。但是血清會影響復(fù)合物的形成，因為蛋白質(zhì)可能會干擾復(fù)合體的形成。一旦復(fù)合體形成，即可將其加入到含血清培養(yǎng)基的細胞中。

        不可以，抗生素，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用抗生素，甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用抗生素。

        需要去內(nèi)毒素，因為內(nèi)毒素會對細胞造成傷害，嚴重的甚至殺死細胞。在提取質(zhì)粒的過程中，可能會殘留有細菌（如大腸桿菌）產(chǎn)生的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素水平增加可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率的大幅下降。

        A260 / A280 值大于或等于 1.8，意味著該質(zhì)粒 DNA 是純的；A260 / A280 讀數(shù)小于 1.8，表明樣品可能被芳香族產(chǎn)物（即苯酚）或蛋白質(zhì)污染；讀數(shù)大于 2.0，則表明樣品被 RNA 污染。

        對于瞬時轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染的 DNA 沒有整合到宿主基因組中，所以外源 DNA 在后續(xù)的細胞有絲分裂階段將丟失。外源基因的表達是短暫的（最長 7-10 天），但表達水平很高，因為在同一個細胞里會有多個拷貝的 DNA。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染的 DNA 能夠整合到宿主基因組，因此轉(zhuǎn)染細胞及其子代細胞的基因組中會同時保留轉(zhuǎn)染的 DNA。外源基因也會隨著篩選過程而表達。由于每個細胞中只整合了 1-2 個 DNA 拷貝，所以表達水平較低。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率只有瞬時轉(zhuǎn)染的 1-10％。

        一般效果在 1 周內(nèi),傳不了幾代就丟失了,功能性實驗做不了，要想超過 1 個周最好用病毒感染細胞，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。

        脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染的主要優(yōu)勢是能取得更高的轉(zhuǎn)染效率，即使是不能使用磷酸鈣介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的細胞類型。此外，脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染不僅能用于寡聚核苷酸到大 DNA 范圍內(nèi)的 DNA 遞送，還能遞送 RNA 和蛋白質(zhì)。

        質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法用于某些細胞類型，例如非分裂細胞，而病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)既能用于分裂細胞又能用于非分裂細胞，比如難以轉(zhuǎn)染的神經(jīng)細胞。

        轉(zhuǎn)細胞的質(zhì)粒是不會復(fù)制的，真核生物沒有這種機制，因此會隨著細胞的生長分裂，質(zhì)粒會逐漸丟失，只有整合到基因組的才會隨著細胞增殖而復(fù)制。

        瞬時轉(zhuǎn)染是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細胞內(nèi)（主要指HEK293細胞），該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。隨著細胞的生長分裂，外源基因會逐漸丟失。質(zhì)粒在細胞內(nèi)能夠存在3-4天，最長7-10天就會降解

        要看細胞和質(zhì)粒而定。一般情況下轉(zhuǎn)染 24～48h 后。

        瞬轉(zhuǎn)后盡量不要傳代，否則會影響轉(zhuǎn)染效率，即使傳代，也最好高密度傳。