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CRISPR sgRNA 文庫服務

服務簡介

          CRISPR-Cas9 技術作為最被廣泛接受的基因編輯工具，具有精準、廉價、易于使用的特點。 由于基因組序列中PAM序列的廣泛存在，運用CRISPR-Cas9技術基本能實現對基因組中所有基因的編輯。CRISPR文庫基于CRISPR/Cas9技術建立高通量基因篩選方案，通過微陣列技術合成高質量寡核苷酸序列，高通量的構建sgRNA質粒文庫，包裝慢病毒后以低MOI（通常＜0.3）感染待篩選細胞，確保一個細胞只進入一種sgRNA，再給細胞加以篩選因素（如藥物處理、低氧處理、病毒感染或細胞本身的生存能力等），收集篩選后不同時間段（0 day/7day/14day）的細胞進行NGS測序，正向篩選或負向篩選分析實驗組與對照組之間sgRNA的豐度變化情況，獲得與篩選因素相關的靶基因。艾基生物整合多個技術平臺，可提供CRISPR sgRNA文庫的一站式合成及基因功能篩選服務，包括快速高效地實現sgRNA oligo pool合成及文庫構建，質粒制備，病毒包裝，細胞轉染、NGS測序和數據分析。

服務流程 

服務優勢

1、豐富的基因合成和建庫經驗，確保文庫的多態性和均一性, 文庫可達10⁸。

2、根據客戶自身需求選擇sgRNA表達載體，并提供轉染級質粒。

3、提供從sgRNA設計、文庫構建到慢病毒包裝的一站式服務。

應用案例

維莫非尼 (vemurafenib,PLX) 是一種用于治療BRAF V600突變陽性的不可切除或轉移性黑色素瘤的藥物，癌細胞產生的突變可以對該藥物產生抗性。科學家試圖找到導致黑色素瘤中對BRAF蛋白激酶抑制劑維莫非尼（PLX）產生耐藥性的基因靶點，以A375細胞為模型，應用GeCKO正向選擇，確定發生敲除的導致抗藥性的基因，并針對新靶點開發藥物。

A：A375黑色素瘤細胞PLX耐藥篩查時間線 

B：暴露于PLX的條件下，導致轉導的A375細胞生長停滯，這些細胞攜帶V600E功能獲得BRAF突變

因此能夠富集一小群通過Cas9/sgRNA介導的編輯而變得耐藥的細胞。Vehicle是對照組

PLX處理14天后，與對照處理的細胞相比，sgRNA分布顯著不同（Wilcoxon秩和檢驗，P < 10?10），并且與所有其他條件分開聚集。

作者發現一個小的基因集，在PLX處理14天后，靶向每個基因的多個sgRNA富集，這表明這些特定基因的丟失有助于A375細胞獲得PLX抗性。

示例圖

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